DNA細胞轉染實驗步驟
下面以Entranster-H4000,DNA轉染試劑為例,簡要說明DNA細胞轉染實驗步驟
1.提前一天細胞鋪板
提前一天將細胞種植在24孔板中,以轉染時細胞密度在60%左右為宜。
2.轉染過程
⑴將0.8μg的DNA用25μl無血清稀釋液稀釋,充分混勻,制成DNA稀釋液。
注意:無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無血清DMEM或1640。
⑵將2μl的EntransterTM-H4000用25μl無血清稀釋液體稀釋,充分混勻,制成EntransterTM-H4000稀釋液。室溫靜置5分鐘。
⑶將EntransterTM-H4000稀釋液分別加入到DNA稀釋液中,充分混勻(可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上),室溫靜置15分鐘。轉染復合物制備完成。
⑷將轉染復合物加入到含細胞和完全培養基的培養容器上,輕柔混勻。
注意:①對本試劑,采用含血清的全培養基有助于提升轉染效率。②完全培養基可加抗生素。
⑸培養4-6小時后更換培養基,繼續培養24-48小時。
注意:①如細胞沒有毒性等不良情況,轉染后4-6小時可不必更換培養基。
重要提示
1.本品在轉染過程中可以添加抗生素,抗生素的添加與否不影響轉染效率和毒性。
2.如轉染后需要用Trizol提取RNA,建議轉染后6小時換液。